ГОСУДАРСТВЕННОЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ
НОРМИРОВАНИЕ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения
концентрации препарата ЭМ-1 «Байкал»
по одному из ведущих компонентов
(Lactobacillus casei-21)
в воздухе рабочей зоны

Методические указания

МУК 4.2.1071-01

Минздрав России
Москва 2002

1. Разработаны к. м. н. Сергеюк Н. П. (Научно-исследовательский центр «Экос»).

2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 r.

3. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ

УТВЕРЖДАЮ

Главный государственный

санитарный врач Российской

Федерации - Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г. Г. Онищенко

20 сентября 2001 г.

МУК 4.2.1071-01

Дата введения: с момента

утверждения

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод микробиологического измерения концентрации препарата ЭМ-1 «Байкал» по одному из ведущих компонентов (Lactobacillus casei-21) в воздухе рабочей зоны

1. Общие положения и область применения

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентраций клеток штамма Lactobacillus casei-21, являющегося ведущим компонентом консорциума микроорганизмов (препарат ЭМ-1 «Байкал») в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентрации от 100 до 50000 клеток в 1 м³ воздуха.

Методические указания разработаны с целью обеспечения микробиологического контроля концентрации препарата «Байкал ЭМ-1» по одному из ведущих компонентов Lactobacillus casei-21 в воздухе рабочей зоны и производственных помещений и оценки соответствия уровня его содержания гигиеническим нормативам на основе учета требований ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования», ГОСТ 8.563-96 «ГСИ. Методики выполнения измерений».

Методические указания предназначены для центров госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий биотехнологических предприятий, микробиологических лабораторий, научно-исследовательских институтов, работающих в области гигиены окружающей среды и аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

2. Характеристика штамма Lactobacillus casei-21

Семейство:                       Lactobacillaceae

Род:                                   Lactobacillus

Вид:                                  casei

Штамм:                            21

На поверхности плотных питательных сред образует мелкие круглые колонии. Глубинные колонии - вогнутые, иногда с выростами. Форма клеток - палочки разной длины, образуют короткие и длинные цепочки, неподвижные, неспорообразующие, грамположительные. Отмечена также тенденция к образованию заметно искривленных (изогнутых) клеток.

3. Пределы измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток Lactobacillus casei-21 в воздушной среде в диапазоне концентраций от 100 до 50000 клеток в 1 м³ воздуха при доверительной вероятности 0,95. ПДК_р.з. 2000 кл/м³.

4. Метод измерений

Метод основан на аспирации из воздуха клеток Lactobacillus casei-21 на поверхность плотной питательной среды и подсчете выросших колоний по типичным морфологическим признакам.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)                                                                                                              ТУ 64-12791-77

Термостаты электрические суховоздушные или водяные

Автоклав электрический                                                                                                              ГОСТ 9586-75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами

Холодильник бытовой

Весы лабораторные, аналитические типа ВЛА-200

Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа «Биолам» Л-211

Лупа с увеличением х 10                                                                                                              ГОСТ 25706-83

Чашки Петри бактериологические плоскодонные, диаметром 100 мм

Пробирки биологические, вместимостью 20 и 35 мл                                                                                                              ГОСТ 10515-75

Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                                                                                                              ГОСТ 10515-75

Колбы конические, вместимостью 250 и 500 мл                                                                                                              ГОСТ 1770-74

Секундомер                                                                                                              ГОСТ 9586-75

Барометр                                                                                                              ГОСТ 24696-79

Марля медицинская                                                                                                              ГОСТ 9412-77

Вата медицинская гигроскопическая                                                                                                              ГОСТ 25556-81

5.2. Реактивы, растворы

Агар микробиологический                                                                                                                 ГОСТ 17206-96

Селективная среда для молочно-кислых палочек Lactobacillus casei-21

Среда Рогозы (состав питательной среды %):

дрожжевой экстракт - 0,5; триптический гидролизат казеина - 1,0; твин-80 - 0,1; глюкоза - 2,0; натрий уксуснокислый - 2,5; лимоннокислый аммоний - 0,2; ледяная уксусная кислота - 0,132; соль Б - (магний сернокислый - 11,5 г; марганец сернокислый - 2,86 г; железо сернокислое - 0,58 г; вода 100 мл) - 0,5; калий фосфорнокислый однозамещенный - 0,6, рН среды 0,6;

вода водопроводная - 100 мл;

агар-агар - 1,5.

Стерилизация при 3/4 атмосферы, 20 мин. После остывания раствора добавляют 9 мл этилового спирта для подавления посторонней микрофлоры и разливают данный раствор асептично по 20 мл в чашки Петри.

6. Требования безопасности

При выполнении измерений концентрации клеток Lactobacillus casei-21 в воздушной среде соблюдают:

·       правила техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.005-88;

·       правила электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации прибора;

·       требования, изложенные в руководстве «Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности (1980);

·       положения «Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности» (1977).

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований.

8. Условия измерений

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях в соответствии с ГОСТ 15150-69 при температуре воздуха (20 ± 5) °С, атмосферном давлении 630-800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80 %.

9. Проведение измерений

9.1. Условия отбора проб воздуха

Для определения микроорганизма воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин на поверхность плотной питательной среды. Время аспирации воздуха 20 мин. Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

9.2. Выполнение анализа

Метод предполагает учет количества типичных по морфологическим признакам колоний, выросших на 3-4 сутки после посева воздуха. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний.

Селективную среду тщательно перемешивают и разливают по 20 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.

После отбора проб воздуха чашки Петри инкубируют в термостате при 36 °С, через 72 ч производят подсчет выросших типичных колоний. При необходимости культуру подвергают микроскопированию.

10. Вычисление результатов измерений

Расчет концентрации клеток в 1 м³ воздуха производят по формуле:

 кл/м³, где

Х - концентрация клеток в воздухе;

N - количество колоний, выросших на чашке;

1000 - коэффициент перерасчета на 1 м³ воздуха;

V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).

Препарат «Байкал ЭМ-1» представляет собой консорциум микроорганизмов, в котором Lactobacillus casei-21 составляют 30 % от общего числа микроорганизмов. Streptococcus lactis - 30 %, бактерии фотосинтеза Phodopseudomonas palistris - 30 %, сахаромицеты - Saccaromyces cerevisial - 10 %. Концентрацию препарата «Байкал ЭМ-1» рассчитывают исходя из процентного отношения микроорганизмов, входящих в его состав, по формуле:

A=100×N/d, где

А - концентрация консорциума (кл/м³);

N - концентрация контрольного микроорганизма (кл/м³);

d - содержание контрольного микроорганизма в консорциуме (%).

Контрольным микроорганизмом для данной методики является Lactobacillus casei-21.

11. Оформление результатов измерений

Результаты измерении оформляют протоколом по форме.

Протокол №

количественного микробиологического анализа препарата ЭМ-1 «Байкал» в воздухе рабочей зоны

Дата проведения анализа                                                             

Место отбора пробы                                                                     

Название лаборатории                                                                 

Юридический адрес организации                                              

Результаты микробиологического анализа

Ответственный исполнитель

Научный руководитель